读文献丨血浆细胞外囊泡中的外泌体：盐皮质激素受体相关高血压的新型潜在生物标志物？...

13实有PA症状在弧健康检查时(无MR糖皮质激素疗程)和随访时(药品或疗程疗程后最少3个同月)的工作人员粪便液(spot urine)，以除去uEVs。更为每个参与者在疗程前后uEVs之中pendrin素质的叠加在。在第二组归纳之中，从28实有从未运用于MR糖皮质激素的PA症状(其之中11实有症状也参与了第二组归纳)之中获取了工作人员粪便液，并归纳了uEVs之中pendrin素质与生化实实有的持续连续性。根据更大稍微的通报，归纳对生命体uEVs展开了除去。生物实验者之中，六周龄雄连续性Sprague-Dawley鼠类来自横滨实验者生物科学。鼠类在单脾切掉术(Aldo组)后，通过微型压缩机以0.75μg/h的施打接下来透析十二指肠。十二指肠的施打与归纳者前的实验者赞同。一组口服十二指肠的鼠类不能接受萘类MR糖皮质激素esaxerenone[混合(mixed in chow)，0.001%；仅有1 mg/kg腰围/天；Aldo+Esax]。大鼠鼠类展开实为疗程(a sham operation )(获知实为疗程组鼠类和不能接受接下来透析溶媒的从未切掉脾的鼠类之有数的pendrin素质相似)。在整个实验者过程之中，所有鼠类皆不能接受含有0.3% NaCl的标准化食物。

归纳对uEVs想到电镜捕捉到，展开细胞膜质印迹和肽恶性竞争测试(Peptide competition assay)以及免疫子系统荧光归纳。统计学上，四支有数更为转用非配对t筛选。对于多重更为，转用方差归纳展开统计归纳，然后展开Tukey当面筛选。配对t筛选用于指标pendrin素质随时有数的叠加在。实实有之有数的持续连续性通过Pearson子系统连续性筛选展开归纳。在子系统连续性归纳前，对ARR、血液十二指肠、PRA和粪便Na + /K + 展开下式变换。

归纳主要结果

P A症状粪便液EVs之中pendrin小分子和小分子的侦测

我们首先描述了与PA症状除去的uEVs之中的pendrin频率，如下图1A下图，材料的电子显微镜归纳表明了外泌体样微粒(形状为20~100 nm)富集，从而有效连续性了材料数量级。运用于抑止pendrin抑止体对uEVs展开Western blot归纳推断，在~120 kDa和~240 kDa处有两条免疫子系统中有数体带，分别代表小分子和小分子范实有(下图1B)。通过与免疫子系统pendrin肽恶性竞争，这两种频率被无论如何抑止(下图1B)，表明pendrin在uEVs之中平庸出小分子结构。在下面的归纳之中，两种范实有都最主要在内以确定uEVs之中的pendrin金属量。

下图1. 侦测从原发连续性十二指肠剧增病症症状除去出的粪便液细胞膜外囊馒头之中的pendrin

在PA啮齿树突状之中粪便液EVs之中pendrin素质与十二指肠pendrin金属量的持续连续性

尽管uEVs被认为是各种十二指肠疾病的简单生命体标志物，但其在十二指肠生命体学之中的持续连续性亦然不清楚。接下来，归纳者运用于十二指肠氯化钾的鼠类仿真测试了pendrin在粪便EVs之中的表征重要连续性。Sprague-Dawley鼠类在单脾切掉术(unine- phrectomy)后接下来透析十二指肠。一组口服十二指肠的鼠类同时不能接受一种MR糖皮质激素esaxerenone。4周后，推算出十二指肠和uEVs之中的pendrin素质。正如前在完全相同仿真之中所通报的，在口服十二指肠的鼠类之中，在水连通细胞膜-2-阴连续性闰细胞膜(aquaporin-2-negative intercalated cells)的山腰膜极高度侦测到pendrin(下图2A)。然而，口服十二指肠的鼠类不能接受esaxerenone后的pendrin频率与大鼠生物的pendrin频率相似(下图2A)。Western blot归纳表明， 十二指肠相当大缩减在十二指肠之中的pendrin金属量(缩减在2.1倍)，几乎无论如何可被esaxerenone切断(下图2B)。

然后，归纳者归纳了uEVs之中pendrin素质(可视Alix)与十二指肠之中pendrin素质(可视CBB密度)的持续连续性。与生命体粪便液样本的结果赞同，在鼠类uEVs之中侦测到小分子范实有的pendrin将近为240 kDa，小分子范实有的pendrin将近为120 kDa(下图2C)。通过免疫子系统pendrin肽先于孵育再次无论如何抑止这些频率(下图2C)。将近300 kDa的额外条带从未被切断肽抑止，表明该条带包含非特异连续性频率。

归纳者量化了uEVs之中pendrin的金属量，并将其素质与十二指肠pendrin素质展开更为。子系统连续性归纳推断，uEVs之中pendrin素质与十二指肠之中pendrin金属量极高度子系统连续性( R 2 =0.500； P =0.0069)(下图2D和E)，表明 Western blot归纳的uEVs之中的pendrin可以先于测十二指肠氯化钾时十二指肠之中pendrin金属量的素质。

下图2. 归纳口服十二指肠的鼠类和不能接受萘矿皮质激素复合物(MR)糖皮质激素esaxerenone的鼠类十二指肠和uEVs之中的pendrin金属量

更大稍微的归纳记录了氯化钾矿皮质激素后uEVs之中ENaC和NCC素质的急连续性叠加在。归纳还指标了在不能接受慢连续性十二指肠透析加在或不加在esaxerenone的鼠类仿真之中，uEVs之中的ENaC和NCC素质是否是与十二指肠素质子系统连续性。与pendrin的结果完全相同，归纳发掘出uEVs 之中cleaved ENaCγ和NCC素质与十二指肠之中的素质相当大子系统连续性(下图3)。这些数据与更大稍微的归纳赞同，大稍微表明了uEVs归纳的简单连续性。

下图3. 十二指肠口服鼠类和esaxerenone疗程鼠类uEVs之中NCC和ENaC的归纳

PA症状疗程后粪便液EVs之中pendrin的降高于

归纳者健康检查了PA症状的uEVs之中的pendrin素质是否是因疗程而偏离。13实有症状在疗程前后(单侧十二指肠切掉术和药品MR切断)通过Western blot归纳uEVs之中的pendrin素质。如下图4A和下图4B下图， 疗程后患有PA的病人的pendrin金属量较弧相当大增大(降高于49%； P

下图4. 从PA病人除去的粪便液EV之中pendrin的疗程前后归纳

为了深入了解到与pendrin金属量增大子系统连续性的心理因素，归纳运用于弧时获得的几个病理实实有展开了子系统连续性归纳。发掘出疗程后pendrin上升的稍微与弧时的下式转化(log- transformed)的十二指肠/咪唑比值(ARR)相当大子系统连续性(R 2 =0.376； P =0.026)(下图5A)。如下图5B和下图5C下图，血液十二指肠素质和血液咪唑活连续性(PRA)之有数很难相当大持续连续性。考虑到与血液十二指肠素质的相当大持续连续性可能与其极高变异连续性以及当前归纳之中受试样本数量受限制有关。

原先证明表明，pendrin在腺体物量参量、钾平衡点和定量可调之中起着关键依赖连续性。接下来，归纳归纳了pendrin素质与血液K + 和BP素质的持续连续性。 pendrin素质与弧血液 K+ 素质深褐色负子系统连续性( R 2 =0.249； P =0.082；下图5D) 。然而， 归纳发掘出pendrin上升与收缩压之有数很难相当大持续连续性(下图5E)，这可以通过大多数症状氯化钾抑止极糖尿病药品来控制肝功能这一事实来解释。由于大多数归纳参与者的血液碳酸氢矿素质不可用，归纳运用于了血液 [Na + ]-[Cl − ] 差异作为PA之中血液碳酸氢矿素质替代推估(该值与归纳的鼠类PA仿真之中的血液碳酸氢矿素质密切子系统连续性)。如下图5F下图， pendrin降高于与血液[Na+ ]-[Cl− ]之有数很难相当大持续连续性差别。

下图5. 疗程后pendrin素质叠加在与弧十二指肠咪唑比率(ARR)(A)、血液十二指肠(B)、血液咪唑活连续性(PRA)(C)、 血液K + (D)、收缩压(BP)(E)和血液[Na + ]-[Cl − ] 之有数的人关系差异(F)

PA症状粪便液EVs之中pendrin与ARR的持续连续性

为了有效连续性pendrin和ARR之有数的持续连续性，归纳最终指标了28实有从未不能接受MR糖皮质激素或十二指肠切掉术的PA症状在样本获取时uEVs之中的pendrin金属量与ARR之有数的关联。 子系统连续性归纳推断，针对Alix可视的pendrin金属量与ARR相当大子系统连续性( R 2 =0.193； P =0.019) (下图6A)，表明了上述归纳之中捕捉到到的人关系。此外，完全相同于更大稍微详细归纳来自极糖尿病病人的uEVs之中ENaC的归纳，归纳者发掘出uEVs 之中的 pendrin金属量与PA症状的粪便Na + /K + 比值相当大子系统连续性( R 2 = 0.244； P =0.008)。

下图6. 从未不能接受十二指肠切掉术或MR糖皮质激素疗程的PA症状粪便液EVs之中pendrin金属量与ARR(A)和粪便Na + /K + (B)的持续连续性归纳

归纳结论

该项归纳证明，在十二指肠氯化钾鼠类仿真之中，在uEVs之中侦测到pendrin以小分子和小分子范实有存在，这与十二指肠pendrin金属量子系统连续性。归纳还发掘出，在PA症状之中，通过十二指肠切掉术或药品MR切断，uEVs之中的pendrin素质相当大增大；疗程前的叠加在稍微与ARR子系统连续性。最后，圆柱体归纳推断，uEVs之中的pendrin素质与ARR相当大子系统连续性。这些数据与实验者归纳赞同，实验者归纳推断在十二指肠氯化钾长时有数下pendrin受到焦虑，表明其在十二指肠游离的腺体物和电解质出现异常之中的依赖连续性。在生命体PA的疗程之中pendrin金属量是减弱的，uEVs之中pendrin和其他细胞膜的归纳有助于理解极糖尿病的病理表征学。

大稍微谈论和点评，且看下回分解~

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